Особенности серологических реакций при диагностике бруцеллёза животных

Оцените материал
(6 голосов)

analiz2Серологическая диагностика – наиболее распространенный метод диагностики бруцеллёза, при котором с помощью различных реакций проводится выявление специфических антител к бруцеллёзу и выявляется нарастание титра антител.

Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных:

- в реакции агглютинации (РА) в пробирках,

- реакции связывания комплемента (РСК),

- реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК),

- реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД),

- пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба - РБП)

- реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

и в молоке коров - кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.

     Почему так много серологических реакций на бруцеллёз?

Во время бруцеллеза в организме животного происходят защитные реакции, вызванные внедрением возбудителя. На разных этапах развития заболевания в организме больного животного вырабатываются те или иные антитела, которые выявляются в одной или в нескольких реакциях. Так  в начале заболевания образуются  антитела, которые выявляются в основном в реакции агглютинации (РА), а самые поздние антитела (спустя шесть месяцев после заражения) улавливаются в реакции иммунодиффузии (РИД). Поэтому для выявления бруцеллеза разработана не одна реакция. На разных стадиях заболевания животного в зависимости от дозы попавшего в организм возбудителя,  и от резистентности самого  организма животного в тот или иной момент наличие специфических антител к бруцеллёзу показывают лишь определённые реакции.

Поэтому  чтобы уловить  специфические антитела, при  поступлении сыворотки крови в лабораторию для исследования на бруцеллез ставится комплекс серологических реакций (из РБП, РА, РСК, РИД, РНГА, КР),  на основании  результатов которых можно установить  диагноз «бруцеллез».  В зависимости от видов животных, и целей исследования используют те или иные серологические методы.

На ранних стадиях бруцеллезного процесса наиболее чувствительна реакция агглютинации (РА). Агглютинины в сыворотке крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10-15-го дня заболевания. Наиболее высокий титр антител отмечают обычно через 1-3 месяцев от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться. У отдельных особей повышенный титр антител может сохраняться до 2 лет.     

Реакция связывания комплемента (РСК)  и реакция длительного связывания комплемента на холоде (РДСК) – специфичные и высокочувствительные методы  диагностики бруцеллёза, дополняющие данные РА. РДСК  часто применяют вместо РСК  для исследования сывороток крови, обладающих антикомплементарными свойствами. Обе реакции позволяют выявлять комплементсвязывающие антитела к бруцеллам, появляющиеся в крови  больного животного позже агглютининов. В связи с этим РСК (РДСК)  позволяет выявить большее количество больных животных в стадах с хронической инфекцией бруцеллёза. Максимальные титры  комплементсвязывающих антител в РСК (РДСК) регистрируют к 4-му месяцу заболевания, в дальнейшем титр снижается, но в небольшом количестве их обнаруживают в течение нескольких лет. 

Роз бенгал проба (РБП) применяется при плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез в качестве экспресс-метода на неиммунизированных противобруцеллезными вакцинами животных. В основе этой реакции лежит непосредственное соединение антигена и антитела. РБП является специфичным и чувствительным методом, благодаря кислой реакции антигена, ингибируется проявления неспецифических антител. На постановку РБП (роз бенгал проба – пластинчатая цветная реакция агглютинации) уходит несколько минут, однако с ее помощью нет гарантированной возможности количественно оценить наличие антител Сыворотки крови животных благополучных хозяйств, реагировавшие положительно на РБП, сразу же исследуют в РА и РСК, РА и РИД, или в  РНГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Сыворотки, с которыми получена отрицательная РБП, дополнительно в РА и РСК (РДСК) не исследуют.      

       Реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД).

Сущность метода состоит в выявлении бруцеллезных антител, основанном на способности антител и антигена диффундировать в агаровом геле и при взаимодействии образовывать комплекс антиген-антитело, наблюдаемый в виде линии преципитации. Результат исследований становится известен лишь спустя 48 часов. Используется для контроля эпизоотического состояния по бруцеллезу животных не ранее чем через 1,5 месяца после вакцинации и  для дифференциации положительных реакций, полученных в РА или (и) РСК (РДСК) по истечении 6 месяцев после введения вакцины;

При получении положительного результата в реакции иммунодиффузии, животное признают больным бруцеллезом.

Кольцевая реакция применяется с целью ориентировочной проверки благо­получных по бруцеллезу молочных стад и для проверки молока на рынках. Сущность кольцевой реакции заключается в том, что в молоке бруцеллезных животных при добавлении антигена образуется комплекс антитела с антигеном, который адсорбируется жировыми частицами молока. Жировые частицы вслед­ствие своего малого удельного веса поднимаются наверх, увлекая адсорбиро­ванный агглютинат, который в зависимости от цвета антигена образует на по­верхности жидкости окрашенное кольцо. Преимущество КР с молоком заключается в простоте постановки и быстроте получения результатов. Всех животных, реагирующих по КР в свободных от бруцеллеза стадах, необходимо перепроверять по РА и РСК (РДСК).

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) при бруцеллезе является специфической и высокочувствительной. Для её проведения используют эритроцитарный бруцеллезный полисахаридный диагностикум. Метод основан на выявлении бруцеллезным эритроцитарным антигеном специфических антител в сыворотке крови больных бруцеллезом животных или иммунизированных вакцинами против бруцеллеза животных. По диагностической эффективности значительно превосходит используемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РБП и РИД с ОП-С антигеном), вместе взятые, выявляя больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания. При этом является  экспресс-методом пригодным для массовой диагностики бруцеллеза животных,  результат становится известным в течение 3-4 часов,

Мелкий рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, в РНГА не исследуют.

Интерпретация результатов серологических исследований на бруцеллёз  во многом зависит от достоверных данных о благополучии хозяйства по бруцеллёзу и вакцинации против бруцеллёза.

Важно соблюдать сроки  разрешающие проведение серологических исследований после применения вакцины, указанные в инструкции. Так как например аглютиногенные вакцины (из шт. Б. абортус 19, Б. абортус 82 и др.) изготавливают из культур бруцелл, находящихся в S- или в SR (RS)-форме. В организме животных, привитых такими вакцинами, синтезируются специфические антитела, гомологичные S-антигену, выявляемые стандартными бруцеллезными диагностическими препаратами в РА, РСК, РДСК, РБП КР с молоком, РИД с 0-ПС антигеном и др. При нарушении инструкции у таких животных будут выявлены вакцинные специфические антитела.

Также важно строго соблюдать правила отбора и  сроки доставки материала для исследования, которые оказывают большое влияние на результаты исследований.

Помимо этого, иногда встречаются индивидуальные неспецифические реакции  при исследовании сывороток на бруцеллёз.

При  постановки РА и РБП, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакцированных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также рядом других причин.

Кольцевая реакция с молоком (КР)  может давать положительные реакции при исследовании молока коров, больных маститами и другими болезнями, сопровождающимися лихорадкой, а также в первые две недели после отела.

Поэтому при выявлении положительных или сомнительных реакций, рекомендуется проводить повторное исследование  материала, взятого от таких животных, и исследовать их  спустя  15-30 суток в  аналогичных реакциях, а также в других  реакциях показывающих нарастание  или падение титра антител.

Прочитано 34 раз

Поиск по сайту

Россельхознадзор провел заседание Коллегии по итогам деятельности в 2018 году

Интервью Сергея Данкверта в программе "Мнения" на телеканале Россия 24

Выступлении Сергея Данкверта на заседании Совета Федерации об эпизоотической обстановке в России