Серологическая диагностика – наиболее распространенный метод диагностики бруцеллёза, при котором с помощью различных реакций проводится выявление специфических антител к бруцеллёзу и выявляется нарастание титра антител.
Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных:
- в реакции агглютинации (РА) в пробирках,
- реакции связывания комплемента (РСК),
- реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК),
- реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД),
- пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба - РБП)
- реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
и в молоке коров - кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.
Почему так много серологических реакций на бруцеллёз?
Во время бруцеллеза в организме животного происходят защитные реакции, вызванные внедрением возбудителя. На разных этапах развития заболевания в организме больного животного вырабатываются те или иные антитела, которые выявляются в одной или в нескольких реакциях. Так в начале заболевания образуются антитела, которые выявляются в основном в реакции агглютинации (РА), а самые поздние антитела (спустя шесть месяцев после заражения) улавливаются в реакции иммунодиффузии (РИД). Поэтому для выявления бруцеллеза разработана не одна реакция. На разных стадиях заболевания животного в зависимости от дозы попавшего в организм возбудителя, и от резистентности самого организма животного в тот или иной момент наличие специфических антител к бруцеллёзу показывают лишь определённые реакции.
Поэтому чтобы уловить специфические антитела, при поступлении сыворотки крови в лабораторию для исследования на бруцеллез ставится комплекс серологических реакций (из РБП, РА, РСК, РИД, РНГА, КР), на основании результатов которых можно установить диагноз «бруцеллез». В зависимости от видов животных, и целей исследования используют те или иные серологические методы.
На ранних стадиях бруцеллезного процесса наиболее чувствительна реакция агглютинации (РА). Агглютинины в сыворотке крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10-15-го дня заболевания. Наиболее высокий титр антител отмечают обычно через 1-3 месяцев от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться. У отдельных особей повышенный титр антител может сохраняться до 2 лет.
Реакция связывания комплемента (РСК) и реакция длительного связывания комплемента на холоде (РДСК) – специфичные и высокочувствительные методы диагностики бруцеллёза, дополняющие данные РА. РДСК часто применяют вместо РСК для исследования сывороток крови, обладающих антикомплементарными свойствами. Обе реакции позволяют выявлять комплементсвязывающие антитела к бруцеллам, появляющиеся в крови больного животного позже агглютининов. В связи с этим РСК (РДСК) позволяет выявить большее количество больных животных в стадах с хронической инфекцией бруцеллёза. Максимальные титры комплементсвязывающих антител в РСК (РДСК) регистрируют к 4-му месяцу заболевания, в дальнейшем титр снижается, но в небольшом количестве их обнаруживают в течение нескольких лет.
Роз бенгал проба (РБП) применяется при плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез в качестве экспресс-метода на неиммунизированных противобруцеллезными вакцинами животных. В основе этой реакции лежит непосредственное соединение антигена и антитела. РБП является специфичным и чувствительным методом, благодаря кислой реакции антигена, ингибируется проявления неспецифических антител. На постановку РБП (роз бенгал проба – пластинчатая цветная реакция агглютинации) уходит несколько минут, однако с ее помощью нет гарантированной возможности количественно оценить наличие антител Сыворотки крови животных благополучных хозяйств, реагировавшие положительно на РБП, сразу же исследуют в РА и РСК, РА и РИД, или в РНГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Сыворотки, с которыми получена отрицательная РБП, дополнительно в РА и РСК (РДСК) не исследуют.
Реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД).
Сущность метода состоит в выявлении бруцеллезных антител, основанном на способности антител и антигена диффундировать в агаровом геле и при взаимодействии образовывать комплекс антиген-антитело, наблюдаемый в виде линии преципитации. Результат исследований становится известен лишь спустя 48 часов. Используется для контроля эпизоотического состояния по бруцеллезу животных не ранее чем через 1,5 месяца после вакцинации и для дифференциации положительных реакций, полученных в РА или (и) РСК (РДСК) по истечении 6 месяцев после введения вакцины;
При получении положительного результата в реакции иммунодиффузии, животное признают больным бруцеллезом.
Кольцевая реакция применяется с целью ориентировочной проверки благополучных по бруцеллезу молочных стад и для проверки молока на рынках. Сущность кольцевой реакции заключается в том, что в молоке бруцеллезных животных при добавлении антигена образуется комплекс антитела с антигеном, который адсорбируется жировыми частицами молока. Жировые частицы вследствие своего малого удельного веса поднимаются наверх, увлекая адсорбированный агглютинат, который в зависимости от цвета антигена образует на поверхности жидкости окрашенное кольцо. Преимущество КР с молоком заключается в простоте постановки и быстроте получения результатов. Всех животных, реагирующих по КР в свободных от бруцеллеза стадах, необходимо перепроверять по РА и РСК (РДСК).
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) при бруцеллезе является специфической и высокочувствительной. Для её проведения используют эритроцитарный бруцеллезный полисахаридный диагностикум. Метод основан на выявлении бруцеллезным эритроцитарным антигеном специфических антител в сыворотке крови больных бруцеллезом животных или иммунизированных вакцинами против бруцеллеза животных. По диагностической эффективности значительно превосходит используемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РБП и РИД с ОП-С антигеном), вместе взятые, выявляя больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания. При этом является экспресс-методом пригодным для массовой диагностики бруцеллеза животных, результат становится известным в течение 3-4 часов,
Мелкий рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, в РНГА не исследуют.
Интерпретация результатов серологических исследований на бруцеллёз во многом зависит от достоверных данных о благополучии хозяйства по бруцеллёзу и вакцинации против бруцеллёза.
Важно соблюдать сроки разрешающие проведение серологических исследований после применения вакцины, указанные в инструкции. Так как например аглютиногенные вакцины (из шт. Б. абортус 19, Б. абортус 82 и др.) изготавливают из культур бруцелл, находящихся в S- или в SR (RS)-форме. В организме животных, привитых такими вакцинами, синтезируются специфические антитела, гомологичные S-антигену, выявляемые стандартными бруцеллезными диагностическими препаратами в РА, РСК, РДСК, РБП КР с молоком, РИД с 0-ПС антигеном и др. При нарушении инструкции у таких животных будут выявлены вакцинные специфические антитела.
Также важно строго соблюдать правила отбора и сроки доставки материала для исследования, которые оказывают большое влияние на результаты исследований.
Помимо этого, иногда встречаются индивидуальные неспецифические реакции при исследовании сывороток на бруцеллёз.
При постановки РА и РБП, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакцированных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также рядом других причин.
Кольцевая реакция с молоком (КР) может давать положительные реакции при исследовании молока коров, больных маститами и другими болезнями, сопровождающимися лихорадкой, а также в первые две недели после отела.
Поэтому при выявлении положительных или сомнительных реакций, рекомендуется проводить повторное исследование материала, взятого от таких животных, и исследовать их спустя 15-30 суток в аналогичных реакциях, а также в других реакциях показывающих нарастание или падение титра антител.